纲要：冠状动脉疾病（CAD）是发财国度最罕见的疾病。新疗法的进步及其在临床探索中的胜利须要大动物模子诊疗成就确实认。猪的剖解特点与人类彷佛，是一种梦想的动物模子。但是，偶尔其肉体巨细妨碍翻译探索，希奇是成人阶段的细胞或布局移植程序和长时间的考察探索。曾经开拓了最小的实习猪，称为微袖珍猪（MMPs）。
法子：行使5-14个月大的老练的MMPs（N=15，体重：13.4±2.14公斤）。急性心肌梗死（AMI）模子，由冷冻损伤（CI）开辟。在缺血性心脏病（IHD）模子，采纳Ameroid环引发的缺血性心脏病（AC），运用于冠状动脉左前降支，用对角支结扎。两种模子的心脏功效经过钆加强磁共振成像（MRI）和冠状动脉造影（CAG）来评估侧支动脉。术后4周正法动物考察病理变动。
后果：MRI考察到，CI开辟AMI模子的射血分数从57.7±3.2%裁减到35.8±4.7%（n=8）。与此相悖，AC也伤害心脏功效，但由于侧枝进步一些猪并没有进步心脏枯竭（n=7）。钆加强MRI和病理查看阐明这两种模子存在疤痕。CI开辟的AMI模子与AC引发的缺血性心脏病模子左心室地区瘢痕面积比例比：MRI后果为19.4%:10.3%，病理后果为17.6%：9.2%。免疫组化剖析的后果也讲明在AC模子存在显然的重生血管，致使心脏功效受损更大的变动。
论断：MMPs是最小的可用实习猪实用于翻译探索。容许长时间考察成人病理学。在MMPs胜利成立了急性心肌梗死、缺血性心脏病模子。MMP的临床前心脏枯竭模子也许会加快CAD新诊疗法子的进一步进步。
关键词：迷你猪临床前模子冠状动脉疾病心脏枯竭急性心肌梗死缺血性心脏病冷冻Ameroid环
布景：冠状动脉疾病（CAD）是致使发财国度人殒命的紧要起源。当今，冠芥蒂的紧要诊疗法子为经皮冠状动脉参与诊疗、冠状动脉旁路移植术和最好药物诊疗。即使有CAD诊疗的进步，但CAD患者殒命率依然很高。严峻的CAD致使慢性心力枯竭（HF），心脏移植是临了期慢性心衰的唯独灵验的诊疗法子。但是，捐助者枯窘是一个寰球性的关键题目。为熟悉决这一未知足的调理须要，必需开拓各类诊疗战略来诊疗CAD。小鼠和大鼠等动物模子适于探索冠芥蒂的分子机制。但是，啮齿类动物和人类有很大的生理不同，如心律和心脏分量。与此相悖，大型动物模子更逼近人类疾病的生理功效。翻新战略，如基因诊疗，干细胞诊疗和药物诊疗CAD，必需评估临床实验前的临床实验模子的可行性平和安性。别的，新的外科本领和死板配置，如左心室襄理装配，人为心脏和心脏襄理装配的创造难以通太小动物测试和优化。猪做为一个大的动物模子的梦想筛选，由于它们的剖解特点，囊括冠状动脉，相似于人体。别的，与狗不同，猪没有预先造成的侧支动脉。为了考察和评估长时间成人病理的CAD动物模子，曾经开拓出一种微型猪（MMP）模子。MMPs成年分量高达10-20公斤，，而成人的袖珍猪体重40-50公斤。没有汇报比较猪模子CI开辟的急性心肌梗死（AMI）模子和AC开辟的缺血性心脏病（IHD），其为CAD的代表模子。CI已被用来制备AMI模子。心肌面积从心外膜侧受伤，但强壮的上风是可以遏制毁坏的地区。另一方面，AC渐渐萎缩的冠状动脉致使缺血。咱们行使成人MMPs评估AMI和缺血性心脏病的临床前模子的可行性，有助于冠芥蒂的新疗法。
法子：动物、麻醉、镇痛：雌性MMPs（n=15,体重13.44±2.14kg），春秋5-14月龄。采用麻醉前给药氯化咪唑（0.08毫克/公斤肌肉打针）、咪达唑仑（2毫克/公斤，肌肉打针）、阿托品（0.02毫克/公斤，肌肉打针），2-2.5%七氟醚吸入浑身麻醉，经过赐与丁丙诺啡镇痛（0.02mg／kg，iv）在手术发端以前，浑身肝素化是经过静脉输注肝素单元/公斤。
AMI模子：冷冻开辟：对8头雌性猪（体重14.0±1.7公斤，春秋8-14月龄）经过CI法开辟AMI，采纳液氮凝结过的不锈钢棒。在左边第4肋开胸走漏心脏。浑身肝素给药后（单元/公斤，静脉打针），用6-0聚丙烯缝线将2或3对角支结扎。尔后，低温棒安置到左心室前壁2分钟，同时心脏跳动。结尾，合上胸腔。
IHD模子：Ameroid环：缺血性心脏病（IHD）是经过AC引发的，（n=7,体重：12.8±2.51kg，5-14月龄）。左胸第四肋骨处开胸，走漏心脏。浑身肝素给药后（单元/公斤，静脉打针），6-0聚丙烯缝线结扎2或3主对角支。左室前壁的壁疏通用平静剂锁定，尔后将AC植入左前降支（LAD），结扎AC范围。结尾，合上胸腔。
磁共振成像评估心脏功效：在创立的模子以前（基线）和术后4周，用1.5T磁共振成像（MRI）与相控阵心脏线圈对心脏功效举行评估。图象在接续心电门控下呼吸停歇环境下搜罗，并经过钆加强。评估和比较各组左室射血分数萎缩末期容量;舒张期末容积。用钆比较剂打针评估心肌瘢痕。
MMPs冠状动脉血管造影术：术后4周举行冠状动脉造影（CAG）。造影剂离别对左、右冠状动脉举行成像。
病理状态剖析：告竣4周的考察期后，用氯化钾静脉输液（20毫克当量/头）浑身麻醉后正法动物，掏出心脏。将左室分为1-cm厚短轴切片衡量梗死面积（IS）。横向心室切片用2%TTC（2,3,5-三苯基氯化四氮唑）孵育20min，37°C染色心肌。每片数字成像衡量梗死面积，雍塞面积为百分之一的LV表面积。
免疫布局化学的法子探测血管生成：心脏布局，4%甲醛静止，白腊包埋，切片被切割在6微米的断绝，笔直于心脏长轴。免疫荧光染色，心脏布局被4%甲醛静止，包埋，尔后加紧液氮冷冻。对冰冻切片心肌细胞稀奇性标识抗体染色，内皮细胞（EC）标识平和滑肌标识。荧光抗体二抗探测一抗。经过行使荧鲜明微镜对一齐的体外图象搜罗和剖析，免疫荧光染色后，经过vWF阳性细胞数目或疤痕和平常区的SMA阳性血管量化血管生成面积。
后果：冷冻开辟的AMI模子和Ameroid环开辟的缺血性心脏病模子：MMPs的成人阶段体重约10-20公斤。MMP心脏的巨细比农场猪的心脏要小很多。AC（内腔直径为2毫米，恰当MRI行使）当选为萎缩LAD。开胸手术后用6-0线结扎大对角支。LAD的近侧地区被走漏，AC被联接到LAD。当行使1.5mm内径的AC，偶尔会引发室性心动过速。但是，恰当的AC（2毫米内径）并没有触发致命的心律反常。CI开辟AMI模子。一个金属探头的安排，附到MMPs的前壁，探针的中央部份是中空的。首先，用6-0线结扎大对角支，金属探针用液氮冷却10分钟。被压在跳动的心脏的前壁上，联接秒。术中未考察到致命性心律反常。在这两个模子中，动物被悄悄地安置在他们的猪笼后，缝合胸部。没有猪在愉逸死前殒命。
磁共振成像显示心功效：术前和术后1个月经过磁共振成像评估心脏功效。这两个模子的萎缩压和舒张压心室（短轴视图）的代表图象见图。平常猪心脏射血分数为50%-60%（n=15）。AC组心脏射血分数（LVEF）为41.1±8%（n=7）。相悖，CI后一个月心脏射血分数（LVEF）为35.8±4.7%（n=8）。AC模子衡量的LVEF偶尔有更多的变量。LVESV、LVEDV也被做为容量剖析部份评估。AMI或IHD开辟后的一个月，左心室浮现扩大。
AMI和IHD模子瘢痕面积评估：钆加强MRI用于断定LV前壁瘢痕区。在CI开辟的AMI模子中看来一个宽广的疤痕地区。在AMI模子瘢痕面积比例（CI组）19.4±5.9%。急性心肌梗死模子比拟于缺血性心脏病模子疤痕面积的平衡尺寸较大。别的，AC开辟的缺血性心脏病模子的疤痕面积比是可变的，在10.3±7.7%。心脏切片经过TTC染色病理学评估梗死病灶，并对两种形式举行状态剖析。在AMI模子，左心室的心外膜熔解，致使一个薄的瘢痕面积。用TTC染色测定AMI模子瘢痕面积的比例为17.6±4.1%。CI开辟的AMI模子中，瘢痕面积的平衡尺寸较大，缺血性心脏病模子瘢痕面积的比例是可变的，在9.1?±8.1%。心脏切片举行HE染色和Azan染色。宏观病理阐明，CAD模子胜利引发AMI。这些数据阐明，CI开辟AMI模子是创立HF模子的一个平静的法子。
引发的缺血性心脏病模子开辟血管的生成：在缺血性心脏病模子，AC雍塞LAD的近端地区。4头AC开辟的IHD模子经过CAG法评估冠状动脉剖解特点。4头中有3头近端LAD绝对封闭。一头猪PLAD狭隘有75%。AC引发的缺血性心脏病模子中，在LAD远端地区浮现侧支动脉。与此相悖，CI开辟的AMI模子中没有显然的侧支动脉。这些数据讲明，AC开辟缺血，致使不同水平的LAD封闭，并致使侧支动脉进步。
急性心肌雍塞和缺血性心脏病模子的血管重生瘢痕区病理学评估：切片用vWF染色评估微血管生成。在缺血性心脏病模子重心疤痕地区增多重生血管。免疫布局化学αSMA也阐明，在AC开辟的缺血性心脏病模瘢痕产生区增多血管生成。病理质料与CAG后果干系。
论断：在MMPs成立了AMI缺血性心脏病模子。MMPs是探索诊疗CAD的实用动物。这些本领和恰当的动物变化探索将容许探索新的诊疗战略，如干细胞疗法和基因诊疗严峻的HF，并推进新的配置和外科手术的进步
